Читать «Новое в современной генетике» онлайн - страница 88

Онкоген карциномы мочевого пузыря человека свойствен клеткам в клеточных линиях Т24 и EJ. Г. Дер и соавторы (Der et al., 1982), Л. Парадо и соавторы (Parada et al., 1982), В. Сантос и соавторы (Santos et al., 1982) показали, что этот онкоген по последовательности нуклеотидов гомологичен онкогену крысиной саркомы Гарвея, вызываемому вирусом. У человека и крысы онкоген получил название С-Ha-ras-l, у вируса — V-Ha-ras.

Сравнивая полную последовательность нуклеотидов в онкогене из линий EJ и Т24 с их последовательностью в протоонкогене, три коллектива исследователей — К. Табин и соавторы (Tabin et al., 1982), Е. Редди и соавторы (Reddy et al., 1982), Е. Тапаровский и соавторы (Taparowsky et al., 1982)—независимо выяснили природу мутационного механизма превращения протоонкогена саркомы мочевого пузыря в онкоген. Оказалось, что это превращение протоонкогена в онкоген связано с мутацией в одном нуклеотиде, которая вызывает вставку одной неверной аминокислоты в белок, кодируемый геном. Онкоген в 12-й позиции кодирует аминокислоту глицин (кодон ГГЦ), а протоонкоген при нормальной последовательности в гене — аминокислоту валин (кодон ГТЦ). При появлении онкогена мутация состояла в замене в кодоне ГТЦ основания тимин (Т) на основание гуанин (Г).

Для оценки влияния замены аминокислоты валин на глицин существенно, что глицин в отличие от остальных 19 аминокислот не имеет боковой цепи. Это позволяет ему специфически влиять на стереохимию белковой молекулы. Замена глицина на валин создает новые конформационные условия в молекуле белка, которая в таком состоянии изменяет свое взаимоотношение с рядом клеточных мишеней. Аналогичный тип генных мутаций, когда замена одного нуклеотида на другой ведет к важным биологическим последствиям, ранее был установлен на примере серповидноклеточной анемии. В этом случае замена в цепи гемоглобина глутамина на валин приводила к тому, что гемоглобин терял способность к транспорту кислорода (Ingram, 1956).

Д. Каппон и соавторы (Cappon et al., 1983b), исследуя последовательность оснований в онкогене из клеток Т24 карциномы мочевого пузыря человека, подтвердили, что его отличие от клеточного нормального протоонкогена состоит в замене одного нуклеотида в кодоне, кодировавшем аминокислоту валин. Протоонксген содержит четыре экзона. Полученные данные свидетельствуют, что кодирующая последовательность вирусного онкогена возникла при захвате последовательности молекул РНК, возникших после сплайсинга транскрипта протоонкогена Ki-ras крысы. Г. Карми-чел и соавторы (Carmichael et al., 1984), заменив один нуклеотид в ДНК вируса полиомы, получили обратную мутацию. На 1178-й позиции ДНК вируса полиомы расположен кодон ТАЦ, который кодирует аминокислоту тирозин. В этом кодоне аденин был заменен на тимин. Новый кодон ТТЦ кодировал аминокислоту фенилаланин. Мутанты Ру-1178-Т слабо трансформировали фибробласты крыс.