Читать «Диагностический справочник иммунолога» онлайн - страница 129

Сущность метода заключается в том, что лунки агарового геля, содержащего моноспецифическую антисыворотку, заполняют антигеном (в нескольких разведениях с заранее известной концентрацией) и исследуемой сывороткой. Стандартный антиген диффундирует через гель и взаимодействует с антисывороткой, образуя вокруг лунки кольцо преципитации, диаметр которого пропорционален концентрации антигена. График зависимости квадрата диаметра кольца от концентрации антигена представляет собой прямую линию, по которой, зная диаметр кольца исследуемой сыворотки, легко определить концентрацию антигена.

На первом этапе постановки реакции производится подбор оптимальных соотношений моноспецифической антисыворотки и эталонной сыворотки.

На втором этапе определяется количество иммуноглобулинов в исследуемых материалах.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) широко применяется как в научных исследованиях, так и в практическом здравоохранении с диагностической целью.

Существует несколько вариантов постановки иммуноферментного метода. Иммуноферментные определения, по сравнению с другими исследованиями, имеют ряд преимуществ. К ним относится повышенная чувствительность к выявлению в исследуемом материале антител или антигенов в очень низких концентрациях, причем требуется минимум исследуемого материала (0,5 мл сыворотки обследуемого).

Этапы обследования ИФА.

1. Сорбция на твердую фазу антигена в лунки ИФА-планшета для выявления антител к нему.

2. Выявление специфических антител с помощью биопроб путем внесения в лунки планшета для ИФА.

3. Обеспечение инкубации системы в течение определенного времени, во время которого происходит специфическое взаимодействие антигена и антитела на твердой основе.

4. Внесение различных растворов.

5. Обеспечение появления окрашенного продукта, который можно выявить визуально или фотометрически. Сывороточная концентрация многих аутоантител изменяется во время острых и хронических заболеваний. Синтез аутоантител регулируется по принципу обратной связи с уровнем продукции соответствующих антигенов.

Могут появиться стойкие изменения в наборах аутоантител в соответствии с воздействием определенных антигенов. Ранее выявление подобных изменений в организме может остановить развитие патологического процесса. Для раннего выявления специфических иммунных отклонений в последние годы начали применять методы группы Эли-тест, основанные на твердофазном иммуноферментном анализе.

Существует множество специфических обследований с применением этой методики.

Эли-АИМ-тест выявляет состояние общей активности иммунной системы, ее иммуноактивации и иммуносупрессии. При этом оценивается общая активность иммунной системы посредством определений:

– аутоантител к фрагментам ДНК;

– аутоантител к В2-гликопротеину;

– аутоантител к F c-фрагментам иммуноглобулинов (ревматоидный фактор);

– аутоантител к коллагену;

– аутоантител к миозину.

Большинство этих антител синтезируются в организме человека и освобождают его от продуктов естественного отмирания клеток с помощью «молекул-мусорщиков». Их продукция резко возрастает при инфекционных заболеваниях и снижается при иммуносупрессивных процессах.