Читать «Инфекции, передаваемые половым путем» онлайн - страница 142
Юрий Константинович Скрипкин
Основой лабораторной диагностики хламидийной инфекции является иммунофлуоресцентный метод, базирующийся на использовании моноклональных антител, меченных флюоресцеин-изотиоционатом. Современный метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) основан на том, что в исследуемый образец вносятся синтезированные нуклеотидные последовательности (праймеры), комплементарные генетическому материалу исследуемого возбудителя. Такие праймеры способны комплементарно взаимодействовать с геномной ДНК (РНК) инфекционного агента. При температурной обработке исследуемой пробы двуспиральная ДНК денатурирует и становится доступной взаимодействию двух праймеров, комплементарных определенной зоне геномной ДНК. В результате повторных циклов денатурации ДНК происходит избирательная амплификация ее участка, который задается используемыми праймерами. Этим методом достигается специфическая детекция генетического материала возбудителя. Специфичность и чувствительность ПЦР не уступает культуральной диагностике. Культуральное исследование хламидий (золотой стандарт) необходимы в процессе оценки динамики лечения, а также в детской практике.
Для выделения хламидий чаще используют линию клеток Мак-Лея. В культуральную среду добавляют циклогексамид, снижающий метаболическую активность эукариотических клеток. Для стимуляции прикрепления бактерий к клеткам и их фагоцитоза применяют обработку ДЕАЕ-декстраном, который влияет на физико-химические свойства клеточных мембран. Для получения оптимальных результатов при первичном выделении хламидий из клинического образца исследуемый материал наслаивают на поверхность клеток с помощью центрифугировавания, что способствует оседанию микроорганизмов на клеточном монослое и повышает эффективность контакта хламидий с клетками. При инкубации в течение 48-72 ч при температуре 36°С в клетках появляются хламидийные включения, которые можно обнаружить при окарашивании по методу Романовского-Гимза. Однако наиболее чувствительным методом идентификации хламидий в культуре клеток является ИФА с моноклональными антителами, позволяющий обнаружить в 5-8 раз больше включений, чем при окрашивании по Гимза.
Не следует использовать некультуральные тесты на хламидии из-за возможности ложноположительных результатов. Культуральный метод очень важен при подозрении на наличие персистирующей инфекции, поскольку способствует выявлению цитоплазматнческих включений, характерных для такого рода течения хламидийной инфекции (Борисенко К.К., 1997). Хотя для выявления хламидий наиболее информативным является культуральный метод, для экспресс-диагностики хламидиоза предпочтительно использовать метод прямой иммунофлуоресценции с моноклональными антителами. При этом следует учитывать, что исследованию подлежат не свободные выделения, а соскоб эпителиальных клеток.
